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MBP纳米抗体偶联琼脂糖珠
  • 产品货号:
    BN46503
  • 中文名称:
    MBP纳米抗体偶联琼脂糖珠
  • 英文名称:
    MBP Nanobody Agarose Beads
  • 别名:
    Agarose Beads
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN46503-25T

    25T

    ¥2800.00

  • BN46503-50T

    50T

    ¥5200.00

产品描述

MBP Nanobody Agarose Beads是一种共价偶联MBP tag羊驼纳米抗体的琼脂糖珠,适用于从细菌、酵母、植物或动物细胞的裂解物中高效沉淀或纯化MBP tag的融合蛋白。


产品属性

Beads大小:90 µM(琼脂糖珠)。

储存溶液:PBS缓冲液(含有20%乙醇)。

结合能力:20 μL的slurry可以结合10-15 μg MBP tag的融合蛋白。

孵育时间:15-30 min。

亲和力:解离常数nM-pM级别。

保存条件:4℃储存有效期1年,-20℃储存有效期2年。

注意事项:避免高速离心、干燥和反复冻融。


应用范围

可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色质免疫沉淀(ChIP)/RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)、酶活性测定、质谱分析等;


推荐试剂

细胞裂解液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 1.0 % Nonidet™ P40 Substitute(货号BN46010)

RIPA裂解液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.1% SDS, 1.0% Triton™ X-100, 0.5 %deoxycholate(货号BN46011) 

稀释缓冲液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA (货号BN46012)

洗涤缓冲液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.05 % Nonidet™ P40 Substitute (货号BN46013) 

甘氨酸洗脱液:200 mM glycine pH 2.5(货号BN46014) 

中和缓冲液:1 M Tris pH 10.4(货号BN46015) 


注意

1. 针对细菌、酵母、植物和昆虫等细胞样本,请对细胞裂解液进行优化。

2. 涉及免疫共沉淀实验时,建议采用不含变性剂的洗涤液。

3. 上述缓冲液的pH值均是在4℃条件下标定。


声明

产品仅限于实验室研究,请勿用于临床检测治疗。


常见问题及解决方案 

常见问题

可能原因和解决方法

是否可以沉淀tag融合在N端或者C端的目的蛋白

可以免疫沉淀或者纯化tag融合在N端或者C端的目的蛋白

高背景

可能是由于洗涤不充分,可以增加洗涤次数和时间,比如每次洗涤5-10 min,洗涤至少3

必要的时候,可以用1-3%BSA4对珠子封闭1-2 hour

标签抗体特异性差或灵敏度低更换高质量的标签抗体

无特异性结合产生或

免疫沉淀下来的蛋白偏少

目的蛋白有可能聚集,变性或降解,尽量采用新鲜的细胞样品,且在裂解时加入蛋白酶抑制剂,并在冰浴或4条件下进行裂解和结合实验

样品中的目的蛋白的表达量较低,或者裂解不充分,针对不同的目的蛋白,请选择合适的裂解缓冲液

珠子使用过少或者在实验过程中有所损失,请在洗涤缓冲液中加入一定量的去垢剂以减少珠子的粘壁性,并在合适的离心力下收集珠子

必要的时候,可以延长结合的时间,比如4条件下过夜结合,但需保证目的蛋白不降解

免疫共沉淀不成功

相互作用蛋白与目的蛋白不结合,或者需要配体的介导等

蛋白之间的相互作用被破坏,首先尽量使用新鲜的样品进行实验,其次选择合适的裂解液和洗涤缓冲液,比如RIPA裂解缓冲液可能破坏或减弱蛋白之间的相互作用,这时可以尝试温和的去垢剂,如Nonidet P-10Triton X-100