DEAE-纤维素，它采用平均粒径为 50µm 的亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高 的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。它经过接枝即使是纯化病毒， 质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。

1 填料特征：

*检测条件： 层析柱 10 mm×100mm *柱床高 5cm，25℃，流动相为纯水。

2 使用说明： 

2.1 色谱柱装填 

（1）让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液，对所有的缓冲液进行脱气处理（填料不可以超声）。 

（2）称取适量的填料，用纯水室温溶涨 24 小时，或用热水溶胀 4 小时以上（不要水浴，只需将热水倒进填料即可，DE-32 时间相对延长加倍）。溶胀好之后，用纯水清洗 5 倍柱体积。 

（3）检查层析柱所有部件，特别是过滤网是否完好，密封圈、螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。 

（4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。 

（5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

2.2 平衡柱子

用上样的平衡缓冲液平衡柱子后即可上样。（当流出液的 pH 和电导值与起始缓冲液相同时层析柱即完全平衡）。

2.3 上样 

样品的盐浓度和 pH 要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者 pH 过低也许挂不上。通过透析或脱盐的方法进行缓冲液置换，将样品缓冲液转移至起始平衡缓冲液。 

最常见的程序是让目标分子结合到离子交换柱上，其他杂质流出。然而，在一些情况下，离子交换柱 结合杂质而使目标分子流出，这样的操作也是可以的。 

对于目标分子的吸附，选择具有适当 pH 的缓冲液是至关重要的，请参考下表。 

缓冲液的离子强度应保持较低，以免干扰样品结合，推荐的操作 pH 应在缓冲液 pKa 的 0.5 个单位内， 并且和目标分子的等电点（pI）相差至少一个 pH 单位。

2.4 蛋白的洗脱

对于 DEAE 纤维素填料，一般使用盐浓度递增或 pH 值递减（线性或者阶梯梯度）的方式来进行洗脱。 

2.5 再生

根据样品的性质，通常通过用高离子强度洗脱缓冲液，如 2M NaCl 对柱子进行洗涤，或改变缓冲液 pH，然后在平衡缓冲液中重新平衡来进行再生。如果填料吸附性能发生改变，诸如变性蛋白质或脂质的物 质在再生过程中洗脱不下来，则需要通过在位清洗程序 CIP 来清除。

2.6 在位清洗（CIP）

使用几次后，如果发现结合能力有明显改变，这时候需要进行在位清洗。通过用 2-5 倍柱床体积的 0.1M NaOH 溶液在位清洗填料，随后立即用大量纯水彻底清洗直至中性，从而除去沉淀的蛋白质、疏水结合的 蛋白质和脂蛋白。 

3 保存 

未使用的填料，4-30℃密闭保存。使用完的填料，用纯水彻底冲洗，保存在 20%乙醇中，4-8℃保存。

4 注意事项 

（1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的 正常使用。所有的缓冲液必须用 0.45um 的滤膜过滤。 

（2）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，以免漏出填料。 

（3）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.15M，碱会使流速变慢。 

（4）离子交换介质在选择层析柱时，避免使用细长柱，会增加实验操作压力。 

（5）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。