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Super Green I(电泳级)
  • 产品货号:
    BN20133
  • 中文名称:
    Super Green I(电泳级)
  • 英文名称:
    SYBR Green I
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN20133-50μl

    50μl

    ¥340.00

    核酸染料

保存条件:4 °C 避光保存 

  本品用 DMSO 溶解,因 DMSO 的熔点是 18.5℃,使用前请放置到室温充分溶解。

一、胶染法(用法同 EB)(推荐方法,见图 1)

1、制胶时加入 SUPER Green I 核酸染料。冷却胶至 50℃左右,每 100ml 胶中加入 3~5μl SUPER Green I 核酸染料。 

2、按照常规方法进行电泳即可。 

注:此方法染色可以准确确定核酸片段分子量,染料用量相对较少。1ml 染料大约可以做 300 块 100ml 的胶。

二、点染法 (见图 3)

          1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。 

          2、工作液的配制:用电泳缓冲液将 10000×的 SUPER Green I 稀释 100 倍,即为 SUPER Green I 工作液。SUPER Green I 工作液可以置 2~8℃保存一个月以上。 

          3、制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。 

          4、样品染色:向分析样品中加入 SUPER Green I 工作液和载样缓冲液,室温放置 10 分 钟,使 SUPER Green I 与样品中 DNA 充分结合。SUPER Green I 工作液加入量为总上 样量的 1/5~ 1/10。 

          5、DNA Marker 染色:将 5μl DNA Marker、5μl DNA Marker 稀释液和 1μl SUPER Green I 工作液混匀,室温放置 5 分钟,使 SUPER Green I 与 DNA 充分结合。 

          6、上样、电泳:按常规操作。 注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。但大片段稍有滞后现象,如果需要更准 确确定分子量(与 Marker 对比),建议使用胶染法。  

三、泡染法

            1、按照常规方法进行电泳。 

            2、用 pH 7.0~8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照 10000﹕1 的比例稀释 SUPER Green I 浓缩液,混匀,制成染色溶液。 

            3、将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温 振荡染色 10~30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿 上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆盖整个胶板,并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。 

     注:用泡染法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中最多的。

四、点染+胶染法(见图 2)

     此法结合方法 1 和方法 2,灵敏度最高,对于低浓度样本比 EB 检测更灵敏。几种染色方法特点比较 

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SUPER Green I 使用注意事项

    1、在 SUPER Green I 点染法中,电泳时间不要超过 2 小时,否则 SUPER Green I 会从 DNA 上分离出来,会产生弥散状条带。 

    2、用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(与 Marker 对比), 建议使用胶染法(方法 1)。 

    3、在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SUPER Green I 可以全部从双链核酸上去掉。 

    4、如果想对用 SUPER Green I 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液 中加入 0.1%~0.3% 的 SDS。 

    5、在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SUPER Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含 有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。 

    6、SUPER Green I 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等 使用过程中用聚丙烯类容器。

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