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FITC-Annexin V and PI Apoptosis Kit
  • 产品货号:
    BN16012
  • 中文名称:
    FITC-Annexin V and PI Apoptosis Kit
  • 英文名称:
    FITC-Annexin V and PI Apoptosis Kit
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN16012-50T

    50T

    ¥740.00

    细胞凋亡与细胞周期

  • BN16012-100T

    100T

    ¥1250.00

    细胞凋亡与细胞周期

产品规格:50T,100T

产品内容:

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储存条件:4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性 

     FITC-Annexin V: Abs/Em = 494/518 nm

     PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍 

     FITC-Annexin V 和 PI 凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(绿色)和坏死细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。

     FITC-Annexin V 可以标记凋亡细胞。Annexin V 选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称 PS)。在细胞发生早期凋亡时,PS 会外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。用绿色荧光探针 FITC 标记的 Annexin V,即 FITC-Annexin V,可以结合外翻的磷酯酰丝氨酸,从而检测细胞凋亡的重要特征。 

     碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种 DNA 结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI 可以由 488,532 或 546 nm 的激光激发,呈现红色荧光。

使用方法 

     下列实验方案以利用星形孢菌素诱导 Jurkat 细胞凋亡为例,如果使用其他诱导剂和其他类型的细胞,实验条件需要略作调整。

一、流式细胞检测 

1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。此外,设定一组样品做单染, 用于调节补偿。 

2. 收集细胞。悬浮细胞:300 g,4℃离心 5 min 收集细胞;贴壁细胞:用不含 EDTA 的胰酶消化后 300 g,4℃离心 5 min收集细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

     注:用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和培养 基中恢复约30分钟,然后再染色。 胰蛋白酶消化会暂时破 坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞 质表面上,从而导致假阳性染色。

3. 用预冷的PBS 洗涤细胞两次,每次均在 300 g,4℃下离 心 5 min,收集 1-5×105 个细胞并用100 μL 1×结合缓冲液 重悬细胞。 

4. 每管加入 4-5 μL 的 FITC-Annexin V 和 5 μL 的 PI工作液。 

     注:我们推荐准备两管额外的流式管,每管只加入一种单染染料(FITC-Annexin V 和PI),用于流式单染的补偿调节。

5. 室温避光孵育 10-15 min,为避免细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作。 

6. 每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×结合缓冲液,尽快通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。FITC-Annexin V 可以由 488nm 激光激发,检测荧光发射光谱约在 530 nm 处(FITC 通道),PI 通道发射光谱约在 617 nm 处(注:PBS 或 1×结合缓冲液的选择根据不同凋亡处理以及不同细胞具体选择)。

二、荧光显微镜检测

     对于悬浮细胞,可参照流式细胞检测的方法进行具体操作。 

1. 在盖玻片或载玻片小室中接种细胞。 

2. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处 理的细胞样品,作为阴性对照。 

3. 用PBS 洗涤细胞。 注:细胞收集后如果不用 PBS 清洗,可以用含血清的培养 基直接替代Annexin V 结合缓冲液,但是 Annexin V 的使用浓度需要重新优化。 

4. 每 100 μL 的 Annexin V 结合缓冲液中加入 5-25 μL的FITC-Annexin V 和 5 μL 的PI。 

     注:最佳使用浓度由具体实验要求确定。

5. 向培养板中加入足量的染液以覆盖全部细胞,室温避光 孵育 15-30 min。为避免细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至 30 min。 

6. 用 1×结合缓冲液清洗细胞。 

7. 将孵育有细胞的盖玻片置于载玻片上,载玻片可提前加一滴 1×结合缓冲液;对于培养在小室内的细胞,可直接加 入足量的 1×结合缓冲液覆盖细胞。 

8. 使用合适的滤光片在荧光显微镜下观察细胞 。FITC-Annexin V 可用 FITC 适用的滤光片,PI 可用 Cy3 或者 Texas。

注意事项: 

1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。 

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。