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产品规格
售价
备注
BN20545-500ul/25T
500ul/25T
¥2800.00
BN20545-1ml/50T
1ml/50T
¥5200.00
产品描述
GFP Nanobody Agarose Beads是一种共价偶联GFP tag羊驼纳米抗体的琼脂糖珠适用于从细菌、酵母、植物或动物细胞的裂解物中高效沉淀或纯化GFP tag的融合蛋白。
产品属性
Beads大小: 90 µM(琼脂糖珠)。
储存溶液: PBS缓冲液(含有20%乙醇)。
结合能力: 20 μL的slurry可以结合10-15 μg GFP tag的融合蛋白。
孵育时间: 5-30 min。
亲和力解离常数: nM-pM级别。
保存条件: 4℃储存有效期1年-20℃储存有效期2年。
注意事项: 避免高速离心、干燥和反复冻融。
应用范围
可用于免疫沉淀IP/免疫共沉淀CoIP、染色质免疫沉淀ChIP/RNA结合蛋白免疫沉淀RIP、酶活性测定、质谱分析等。
推荐试剂
细胞裂解液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 1.0 % Nonidet™ P40 Substitute(货号BN46010)
RIPA裂解液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.1% SDS, 1.0% Triton™ X-100, 0.5 %deoxycholate(货号BN46011 )
稀释缓冲液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA (货号BN46012)
洗涤缓冲液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.05 % Nonidet™ P40 Substitute(货号BN46013)
甘氨酸洗脱液:200 mM glycine pH 2.5(货号BN46014)
中和缓冲液:1 M Tris pH 10.4(货号BN46015)
注意
1. 针对细菌、酵母、植物和昆虫等细胞样本请对细胞裂解液进行优化。
2. 涉及免疫共沉淀实验时建议采用不含变性剂的洗涤液。
3. 上述缓冲液的pH值均是在4℃条件下标定。
声明
产品仅限于实验室研究请勿用于临床检测治疗。
常见问题及解决方案
常见问题 | 可能原因和解决方法 |
是否可以沉淀tag融合在N端或者C端的目的蛋白 | 可以免疫沉淀或者纯化tag融合在N端或者C端的目的蛋白 |
高背景 | 可能是由于洗涤不充分可以增加洗涤次数和时间比如每次洗涤5-10 min洗涤至少3次 |
必要的时候可以用1-3%的BSA在4℃对珠子封闭1-2 hour | |
标签抗体特异性差或灵敏度低更换高质量的标签抗体 | |
无特异性结合产生或 免疫沉淀下来的蛋白偏少 | 目的蛋白有可能聚集变性或降解尽量采用新鲜的细胞样品且在裂解时加入蛋白酶抑制剂并在冰浴或4℃条件下进行裂解和结合实验 |
样品中的目的蛋白的表达量较低或者裂解不充分针对不同的目的蛋白请选择合适的裂解缓冲液 | |
珠子使用过少或者在实验过程中有所损失请在洗涤缓冲液中加入一定量的去垢剂以减少珠子的粘壁性并在合适的离心力下收集珠子 | |
必要的时候可以延长结合的时间比如4℃条件下过夜结合但需保证目的蛋白不降解 | |
免疫共沉淀不成功 | 相互作用蛋白与目的蛋白不结合或者需要配体的介导等 |
蛋白之间的相互作用被破坏首先尽量使用新鲜的样品进行实验其次选择合适的裂解液和洗涤缓冲液比如RIPA裂解缓冲液可能破坏或减弱蛋白之间的相互作用这时可以尝试温和的去垢剂如Nonidet P-10和Triton X-100 |