
货号
产品规格
售价
备注
BN20549-500ul/25T
500ul/25T
¥2800.00
BN20549-1ml/50T
1ml/50T
¥5200.00
产品描述
HA Nanobody Agarose Beads是一种共价偶联HA tag(YPYDVPDYA)羊驼纳米抗体的琼脂糖珠,适用于从细菌、酵母、植物或动物细胞的裂解物中高效沉淀或纯化HA tag的融合蛋白。
产品属性
Beads大小:90 µM(琼脂糖珠)。
储存溶液:PBS缓冲液(含有20%乙醇)。
结合能力:20 μL的slurry可以结合10-15 μg HA tag的融合蛋白。
孵育时间:30-120 min。
亲和力:解离常数nM-pM级别。
保存条件:4℃储存有效期1年,-20℃储存有效期2年。
注意事项:避免高速离心、干燥和反复冻融。
应用范围
可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色质免疫沉淀(ChIP)/RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)、酶活性测定、质谱分析等;
推荐试剂
细胞裂解液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 1.0 % Nonidet™ P40 Substitute(货号BN46010)
RIPA裂解液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.1% SDS, 1.0% Triton™ X-100, 0.5 %deoxycholate(货号BN46011)
稀释缓冲液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA (货号BN46012)
洗涤缓冲液:20 mM Tris/Cl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.05 % Nonidet™ P40 Substitute(货号BN46013)
甘氨酸洗脱液:200 mM glycine pH 2.5(货号BN46014)
中和缓冲液:1 M Tris pH 10.4(货号BN46015)
注意
1. 针对细菌、酵母、植物和昆虫等细胞样本,请对细胞裂解液进行优化。
2. 涉及免疫共沉淀实验时,建议采用不含变性剂的洗涤液。
3. 上述缓冲液的pH值均是在4℃条件下标定。
声明
产品仅限于实验室研究,请勿用于临床检测治疗。
常见问题及解决方案
常见问题 | 可能原因和解决方法 |
是否可以沉淀tag融合在N端或者C端的目的蛋白 | 可以免疫沉淀或者纯化tag融合在N端或者C端的目的蛋白 |
高背景 | 可能是由于洗涤不充分,可以增加洗涤次数和时间,比如每次洗涤5-10 min,洗涤至少3次 |
必要的时候,可以用1-3%的BSA在4℃对珠子封闭1-2 hour | |
标签抗体特异性差或灵敏度低,更换高质量的标签抗体 | |
无特异性结合产生或 免疫沉淀下来的蛋白偏少 | 目的蛋白有可能聚集,变性或降解,尽量采用新鲜的细胞样品,且在裂解时加入蛋白酶抑制剂,并在冰浴或4℃条件下进行裂解和结合实验 |
样品中的目的蛋白的表达量较低,或者裂解不充分,针对不同的目的蛋白,请选择合适的裂解缓冲液 | |
珠子使用过少或者在实验过程中有所损失,请在洗涤缓冲液中加入一定量的去垢剂以减少珠子的粘壁性,并在合适的离心力下收集珠子 | |
必要的时候,可以延长结合的时间,比如4℃条件下过夜结合,但需保证目的蛋白不降解 | |
免疫共沉淀不成功 | 相互作用蛋白与目的蛋白不结合,或者需要配体的介导等 |
蛋白之间的相互作用被破坏,首先尽量使用新鲜的样品进行实验,其次选择合适的裂解液和洗涤缓冲液,比如RIPA裂解缓冲液可能破坏或减弱蛋白之间的相互作用,这时可以尝试温和的去垢剂,如Nonidet P-10和Triton X-100 |