货号：BN80005 

规格：2 mL * 10 支/盒 附赠 1 支 100 μL 硫代甘油（Monothioglycerol，MTG） 

保存条件：室温避光可保存 4 个月，MTG 室温临时存放，4℃长期保存 

本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途

产品描述

精子冻存液基于棉子糖和脱脂奶粉配方，额外添加 L-谷氨酰胺， 提高精子存活率。本产品需配合精子冷冻麦管、麦管连接器、麦管封口机、精子冷冻麦管漂浮器使用。

冷冻步骤

1、 颈椎脱臼法处死成年雄鼠。腹部用 75%酒精消毒后，剪开皮肤和肌肉，小心拉出睾丸，暴露附睾，用眼科剪分离脂肪、血管和韧带等组织，剪下附睾，放入 120 μL 的冷冻保护剂液滴中，用 1 mL 注射器划开附睾，待精子流出后，将组织去除，用移液器轻柔吹打，使精子和冷冻保护剂充分混合。 

2、 将 0.25 mL 麦管通过麦管连接器与 1 mL 注射器连接，吸入约 100 μL HTF 培养液，吸入 1 cm 空 气，再吸入 10 μL 左右精子悬浮液，再吸入空气，之后吸入约 100 μL HTF 培养液，最后吸入空 气，用麦管封口机热封口。（没有封口机可用金属镊子烧红后夹住麦管尾部封口，吸入 HTF 培 养液目的是防止麦管太轻飘在液氮表面）。

3、 在泡沫盒中倒入液氮，液氮液面距离泡沫盒最上缘约 5-10 cm，将麦管平放在泡沫盒边缘，液氮蒸汽预冷 10 分钟后用金属镊迅速将麦管浸入液氮中，建议使用精子冷冻漂浮器。

4、 精子冻存液中添加硫代甘油（Monothioglycerol，MTG）可有效提高精子复苏率。建议现配现用。 MTG 在精子冻存液内的终浓度为 447 μM，即 0.04 μL/mL。 建议稀释步骤： a. 取一支 2 mL 精子冻存液，加入 16 μL MTG，反复颠倒混匀，MTG 终浓度为 8 μL/mL，此管为 MTG 浓缩液。 MTG 浓缩液也可以用 PBS 或生理盐水稀释。 b. 取 10 μL MTG 浓缩液，加入另外 1 支精子冻存液中，反复颠倒混匀，MTG 终浓度为 0.04 μL/mL。

解冻步骤

1. 水浴加热至 37℃，用镊子将麦管从液氮罐中取出，迅速移到水浴中解冻 15 min。（冷冻后小鼠精子对环境适应性较弱，请动作迅速，小心操作）。 

2. 从水浴中取出麦管，纱布擦干表面，将两端封口处剪开，通过连接管与 1 mL 注射器连接，将精子悬液打入已经预热平衡好的 200 μL HTF 培养液滴中，置于 CO2培养箱获能 50 min。

试剂成分

备注：赠送附属试剂-硫代甘油（100 μL/支） 

—Richard Behringer, Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual（Fourth Edition）

*本产品用热稳定的庆大霉素替代双抗（青霉素-链霉素溶液），延长培养液有效期。